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犬维生素E(VE)ELISA试剂盒组织结构及操作步骤
点击次数:151 发布时间:2019-07-17

组织结构:

1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心35分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。

58彩票app3、细胞上清液:1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟,取上清液。

5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

犬维生素E(VE)ELISA试剂盒操作步骤:

标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,依次进行稀释数倍。

加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

配液:将30倍(48T 的20 倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

58彩票app加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

58彩票app温育:操作同3。

58彩票app洗涤:操作同5。

显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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