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浅析E2检测ELISA试剂盒基础小知识
点击次数:78 发布时间:2019-12-28
   浅析E2检测ELISA试剂盒基础小知识
  E2检测ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
  1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
  2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
  3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
  5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
  操作注意事项
  1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
  2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  3.  标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
  4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
  5.  所有液体组分使用前充分摇匀。
  E2检测ELISA试剂盒操作步骤
  1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3.  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
  4.  随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.  E2检测ELISA试剂盒每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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